Proba NK

Kit je určený na izoláciu DNA/RNA z biologických vzoriek (periférna krv, sliny, hlien, mlieko, moč, spermie, sekrét z prostaty, mozgovo-miechová tekutina, výškrab epitelových buniek z posteriálnej strany hltanovej steny, močového kanála, krčka maternice, atď...) pre ďalšie analýzy s reverznou transkripciou (RNA) a polymerázovou reťazovou reakciou (DNA). Kit je vhodný pre použitie v klinickej diagnostike a vo vedecko-výskumnej praxi. Kit je určený pre aplikáciu in vitro. Kit je určený na izoláciu DNA/RNA pre 100 analyzovaných vzoriek (vrátane negatívnych kontrolných vzoriek).

1. Označiť potrebný počet 1,5 ml skúmaviek (vrátane skúm. pre negatívnu kontrolu „C-“) Poznámka: Pred začatím izolácie je potrebné zohriať lyzačnú reagenciu na 65 °C (10 minút) pre rozpustenie sedimentu.
2. Pridať 10 µl vnútornej kontrolnej vzorky do každej z označených skúmaviek. Použitie vnútorných (interných) kontrolných vzoriek RNA-IC a DNA-IC. RNA-IC vnútorná kontrolná vzorka je určená pre použitie s RT-HEPATHOGEN-C, RT-HEPATHOGEN-C GENOTYPING (formát Real-time), HIV a pre cDNA PCR reakcie HAV, HDV a HGV kity. DNA-IC vnútorná kontrolná vzorka je určená pre použitie s HBV kitom. Použitie vnútornej kontroly v príprave vzoriek sa nepoužíva pre ostatné PCR reakčné sady. Upozornenie! • Ak je vzorka súčasne testovaná na prítomnosť RNA vírusov (HAV, HCV, HDV, HGV, HIV) a DNA vírusov (HBV), tak je nevyhnutné pridať obidve vnútorné kontrolné vzorky (RNA-IC aj DNA-IC). • Ak je vzorka testovaná len na prítomnosť infekcie spôsobenej RNA vírusom (HAV, HCV, HDV, HGV, HIV), tak je nevyhnutné pridať len kontrolnú vzorku RNA-IC. • Ak je vzorka testovaná len na prítomnosť infekcie spôsobenej DNA vírusom (HBV), tak je nevyhnutné pridať len kontrolnú vzorku DNA-IC.
3. Pridať 300 µl lyzačnej reagencie bez toho, aby ste sa dotkli okraja skúmavky.
4. Pridať 100 µl testovaného biologického materiálu do skúmaviek určených pre analýzu, s výnimkou tých skúmaviek, ktoré boli pre izoláciu DNA/RNA predpripravené a „C-“ skúmaviek. Pridať 100 µl negatívnej kontrolnej vzorky do skúmavky označenej ako „C-“.
5. Skúmavky pevne uzavrieť, vortexovať 3-5 sekúnd.
6. Inkubovať skúmavky 15 minút na 65°C, centrifugovať 30 sekúnd pri 13 000 ot/min. pri izbovej teplote za účelom odstránenia kvapiek zo stien skúmavky.
7. Pridať 400 µl zrážacej reagencie do každej skúmavky, vortexovať 3-5 sekúnd.
8. Centrifugovať skúmavky 15 minút pri 13 000 ot/min. pri izbovej teplote.
9. Odstrániť supernatant z každej skúmavky bez porušenia sedimentu, za pomoci jednorázových špičiek.
10. Pridať 500 µl premývacieho roztoku č.1, pevne uzavrieť skúmavky a premiešať otáčaním 3-5 krát.
11. Centrifugovať skúmavky 5 minút pri 13 000 ot/min pri izbovej teplote.
12. Odstrániť supernatant z každej skúmavky bez porušenia sedimentu, za pomoci jednorázových špičiek.
13. Pridať 300 µl premývacieho roztoku č.2, pevne uzavrieť skúmavky a premiešať otáčaním 3-5 krát.
14. Centrifugovať skúmavky 5 minút pri 13 000 ot/min pri izbovej teplote.
15. Odstrániť supernatant z každej skúmavky bez porušenia sedimentu, za pomoci jednorázových špičiek.
16. Sušiť sediment pri otvorených skúmavkách 5 minút pri teplote 65°C.
17. Pridať 50 µl rozpúšťacieho pufru k sedimentu a zohriať skúmavky na 10 minút na teplotu 65°C. Vortexovať 3-5 sekúnd. Upozornenie! Pri práci s kitmi len pre detekciu RNA vírusov (RT-HEPATHOGEN-C, RT-HEPATHOGEN Genotyping, HIV kit; kitmi pre detekciu HAV, HDV a HGV), sa doporučuje sediment rozpustiť v 16,5 µl rozpúšťacieho pufru a to z toho dôvodu, že väčší objem rozpúšťacieho pufra znížuje citlivosť analýzy. Pri práci s HBV kitom a pri súčasnej detekcii RNA vírusov (HAV, HCV, HDV, HGV, HIV) a DNA vírusov (HBV), je potrebné sediment rozpustiť v 25 µl rozpúšťacieho pufru.
18. Centrifugovať skúmavky 30 sekúnd pri 13 000 ot/min pri izbovej teplote za účelom odstránenia kvapiek zo stien skúmavky. Izolovaná DNA/RNA je pripravená pre ďalší postup reverznej transkripcie (RNA), alebo PCR reakcie (DNA, cDNA). Poznámka: Izolovaná RNA musí byť okamžite použitá pre reverznú transkripciu. Preparát RNA nepodlieha skladovaniu. Izolovaná DNA môže byť uskladnená po dobu jedného mesiaca pri teplote -20°C a pri teplote -70°C môže byť skladovaná maximálne jeden rok.