Magnetická izolácia

Vysokoefektívna a rýchla metóda izolácie DNA z biologických vzoriek založená na väzbe DNA s auxotrofným činidlom lokalizovaným na povrchu sklenených guličiek. Magnetická izolácia DNA vzoriek sa doporučuje pri izolácii čistej DNA z rôznych biologických vzoriek s vysokým obsahom DNA.

1. Príprava pracovného roztoku Soľného pufru. 10 ml 10-násobného Soľného pufru dať do odmerného valca. Doplniť redestilovanou vodou do 100 ml a 96% etanolom do objemu 300 ml a premiešať. Hotový pracovný roztok Soľného pufru treba skladovať v hermeticky uzatvorenej nádobe pri teplote 2-8 °C.
2. Do mikroskúmavky objemu 1,5 ml dať 100 ml analyzovanej vzorky. Pridať 300 ml Lyzačnej reagencie a 20 ml suspenzie sorbentu Magnetic (pred použitím Magnetic treba intenzívne premiešať na vortexe do stavu homogénnej suspenzie).
3. Mikroskúmavku vložiť do centrifúgy alebo ručne premiešať 5 minút.
4. Pridať do mikroskúmavky 1 ml pracovného roztoku Soľného pufru (pozri bod 1.) a obsah mikroskúmavky premiešať do homogénneho stavu.
5. Mikroskúmavku vložiť do magnetického statívu na 15-20 sekúnd. Opatrne bez dotyku sorbentu usadeného na stenách odstrániť priezračný supernatant s pomocou vývevy alebo pipety. Ak sa izolácia DNA robí z krvi alebo z homogenátov tkanív s vysokým obsahom hemoglobínu, sediment sorbentu po rozdelení na magnetickom stojane a odstránení supernatantu treba premyť ešte raz 200 ml Lyzačnej reagencie. Ďalej postupovať podľa protokolu.
6. Preniesť mikroskúmavku do obyčajného stojanu.
7. Do mikroskúmavky pridať 1 ml pracovného roztoku Soľného pufru a premiešať obsah mikroskúmavky do homogénneho stavu.
8. Vložiť mikroskúmavku do magnetického stojanu na 15-20 sekúnd.
9. Opatrne odstrániť priezračnú časť zmesi.
10. Zopakovať body 7. až 9.
11. Sediment presušiť pri teplote 65 °C počas 2-3 minút.
12. Do tej istej mikroskúmavky pridať minimálne 100 ml ExtraGene^TM. Pozor! ExtraGene^TM treba odobrať z celkového objemu pri nepretržitom premiešavaní.
13. Suspendovať obsah mikroskúmavky na vortexe do stavu homogénnej suspenzie, potom inkubovať 5 minút pri 65 °C.
14. Ešte raz suspendovať obsah mikroskúmavky na vortexe.
15. Centrifugovať mikroskúmavku pri 5 000 ot./min. 1 minútu.
16. Preniesť supernatant s DNA do čistej mikroskúmavky. Izolovanú DNA skladovať pri teplote (–20 °C).